الفهرس 
IntroductionOnly 14 pages are availabe for public view
 |  | from | 175 |  |  |
| | | from | 175 | | |
Abstract
ل-اسباراجين هو حمض أميني أساسي لنمو الخلايا السرطانية. ولقد بدأ التطور في استخدام ل-اسباراجيناز كعامل علاجي في 1953، وهو يعتبر اليوم واحدًا من أهم الإنزيمات العلاجية من الناحية البيولوجية التكنولوجية والبيولوجية الطبية.
وفي هذه الحالة، يجب إيجاد كائنات دقيقة جديدة منتجة لـ ل-اسباراجيناز والتي يمكنها أن تمنع حدوث آثار جانبية غير مرغوبة.
وفي الدراسة الحالية، أجرى توصيف تجريبي لمنتجي ل-اسباراجيناز على Modified M9 Agar Medium مع الفينول الأحمر ككاشف. وأوضح التعريف المستند إلى التشخيص الشكلي والبيولوجي الكيميائي أن العينات الإيجابية المعزولة المنتجة لـ ل-اسباراجيناز تنتمي إلى Bacillus sp., Pseudomonas sp., E. coli, Proteus and Aeromonas.. وتم التعرف على الكائنات الكامنة باستخدام نظام تعريف بيولوج، والذي أظهر Pectobacterium Carotovorum و Serratia marcescens. وكان النشاط الأولي لـ ل-اسباراجيناز 4,497 وحدة/مل و4,238 وحدة/مل لـ Pectobacterium Carotovorum و Serratia marcescens على التوالي. وأجرى استمثال للظروف الخاصة بانتاج إنزيم ل-اسباراجيناز للعينتين المعزولتين وأدى استمثال الظروف إلى زيادة تقدر بـ 7,5% (من 4,497 وحدة/مل إلى 4,835 وحدة/مل) بواسطة Pectobacterium carotovorum و23% (من 4,238 وحدة/مل إلى 5,221 وحدة/ مل) بواسطة Serratia marcescens على التوالي. وتم فصل العينة الخام بواسطة طريقة اس دي اس-بايج SDS-PAGE) ) والتي أشارت إلى أن الوزن الجزيئي لإنزيم ل-اسباراجيناز هو 35 كيلو دالتون لـ P. carotovorum و36 كيلو دالتون لـ S. marcescens.
وتم استخراج ل-اسباراجيناز واختباره معمليًا من أجل التعرف على نشاط سمية الخلايا باستخدام فحص MMT (3-(4،5-ديميثليازول-2-واي ال)-2,5-ديفينيلتيترازوليوم بروميد) في مقابل الخلايا السرطانية MCF-7، HepGII وWISH . واتضح أن لا يوجد اي تأثير ل-اسباراجيناز من P. carotovorum وS. marcescens على خلايا WISH الطبيعية. ومن ناحية أخرى، اتسم ل-اسباراجيناز من العينتين المعزولتين بالسمية للخلايا السرطانية MCF-7 وHepGII بتركيز مثبط ( IC50) يقدر بـ (15 ميكروغرام/مل و26 ميكروغرام/مل) و(26 ميكروغرام/مل و25 ميكروغرام/مل) على التوالي. وبفعل تأثير إنزيم ل-اسباراجيناز، تم تحليل التعبير الجيني للجينات المنظمة BC12 وBax و p53 بواسطة اختبار تفاعل البوليميراز المتسلسل اللحظي ((RT-PCR. ولقد كشفت هذه الدراسة عن تعبير مرتفع لجين BC12 وp53 في خلايا MCF-7 و HepGII وWISH. ونتيجة لذلك، فإن السمية التي حفزها ل-اسباجيناز من P. carotovorum و S. marcescens في كلا خلايا السرطان MCF-7 وHepGII كانت ترتبط بالتعبير الجيني عن BC12 وp53 مما يشير إلى تنشيط مسار موت الخلايا المبرمج.